新西蘭白兔靜脈注射其t1/2為5.052min，分布速率常數(shù)a為0.139min-1，說明牡荊苷在兔體內(nèi)分布較快，藥物起效迅速。t1/2β為114.291min，血漿中牡荊苷的消除速率常數(shù)β為6.177×10-3min-1，t1/2β遠(yuǎn)大于t1/2α，說明牡荊苷在兔體內(nèi)主要以消除過程為主。

　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明靜脈給予牡荊苷后其在新西蘭白兔體內(nèi)符合二房室模型藥動學(xué)特征。這與李德強(qiáng)[9]報(bào)道的葒草苷在大鼠體內(nèi)符合三房室模型不同，這可能與所用動物種屬不同有關(guān)。3種不同給藥方式在新西蘭白兔體內(nèi)均符合二房室開放模型，并且消除相較短，表明牡荊苷在新西蘭白兔體內(nèi)很快消除，不易蓄積中毒。

　　金蓮花是毛茛科植物金蓮花TrolliuschinensisBunge的干燥花及花蕾，主要有效成分為黃酮類化合物[1]，所含有效成分單體有牡荊苷、葒草苷、槲皮素等。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)牡荊苷具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性[2]，中等強(qiáng)度的抗病毒活性[3]，對缺血性心肌損傷具有良好的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與增加冠脈和心肌血流量、降低血管射血阻力、降低全血及血漿黏度、提高紅細(xì)胞變形能力、抑制血栓形成等有關(guān)[4-8]。

　　牡荊苷作為從中藥中提取分離的有效成分，有必要在臨床前對其活性、安全性和藥動學(xué)進(jìn)行全面的評價。金蓮花中牡荊苷以不同給藥方式在兔體內(nèi)藥動學(xué)研究及在兔體內(nèi)組織分布研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采取靜脈、腹腔、肌肉注射3種不同給藥方式闡明牡荊苷在新西蘭白兔藥動學(xué)過程及靜脈注射后牡荊苷在兔體內(nèi)組織分布情況，為牡荊苷在臨床上的合理用藥提供理論依據(jù)。

　　1材料與儀器

　　美國Agilent1100HPLC(配四元泵、紫外檢測器);日本GR-202型AND分析天平;Sigma公司高速冷凍離心機(jī);北方同正生物技術(shù)發(fā)展公司HQ-60型旋渦混合器。

　　野生金蓮花采自河北省張家口沽源，經(jīng)我院藥物研究所馬淑蘭教授鑒定為金蓮花TrolliuschinensisBunge;牡荊苷標(biāo)準(zhǔn)品(111687)，中國藥品生物制品檢定所;牡荊苷單體(純度98.8%，河北北方學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心自制);液相色譜用有機(jī)溶劑為色譜純，所用水為三重蒸餾水。其它試劑為分析純。新西蘭白兔，雌雄各半，體質(zhì)量(2.5±0.3)kg，由河北北方學(xué)院動物中心提供，室溫飼養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，自由飲水。

　　2方法與結(jié)果

　　2.1色譜條件色譜柱為HypersilBDS-C18(4.6mm×150mm，5μm);流動相為1%乙晴-乙酸(85∶15);檢測波長為340nm;柱溫30℃，體積流量1mL/min;進(jìn)樣量20μL。

　　2.2血樣及組織樣本處理取新西蘭白兔18只，禁食12h，自由飲水，隨機(jī)分為3組，每組6只，20%氨基甲酸乙酯靜脈麻醉(5mL/kg)，頸總動脈插管，以20mg/kg的劑量分別靜脈、腹腔、肌肉注射，0、2.5、5、7.5、10、15、20、25、30、45、60、90、120、180、240、300min，取血0.3mL，11000r/min離心10min，取上清液0.1mL，加乙腈沉淀蛋白，渦流混旋1min，離心，取上清液，微孔濾膜過濾即得。

　　取健康新西蘭白兔60只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為12組，給藥前禁食12h，自由飲水。靜脈注射20mg/kg，分別于5、10、15、30、45、60、75、90、120、180、240、300min放血處死動物，立即解剖取出腎、肝、肺、脾、心、腦組織，用生理鹽水清洗各組織表面浮血，濾紙吸干，精密稱定質(zhì)量，剪碎，加生理鹽水在冰浴中制成50%勻漿，取各組織勻漿0.1mL，加乙腈0.2mL沉淀蛋白，旋渦混勻1min，11000r/min離心10min，取上清液微孔濾膜過濾即得。

　　2.3數(shù)據(jù)處理采用3P97藥動學(xué)軟件對不同給藥方式血藥濃度-時間數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，以理論血藥濃度值與實(shí)驗(yàn)測定值的相關(guān)系數(shù)最大和AIC值最小作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇適當(dāng)?shù)姆渴夷Ｐ停?jì)算藥動學(xué)參數(shù)。所有數(shù)據(jù)均用珋x±s表示，用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件做方差分析。

　　2.4方法專屬性考察按2.1項(xiàng)下牡荊苷峰分離良好，血漿、各組織中雜質(zhì)及內(nèi)源性物質(zhì)均不干擾，且靈敏度高，樣品中牡荊苷的理論塔板數(shù)均大于5000，保留時間為6.96min，與相鄰色譜峰的分離度均大于3。

　　2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線制作新西蘭白兔空白血漿、組織中加入系列質(zhì)量濃度牡荊苷對照品溶液進(jìn)樣后，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸得牡荊苷在血漿、各組織中的標(biāo)準(zhǔn)曲線。見表1。

　　2.6精密度與穩(wěn)定性高、中、低(6.18，3.08，0.154μg/mL)3種不同質(zhì)量濃度樣品的日內(nèi)精密度RSD分別為0.74%、1.32%、3.51%，日間精密度RSD分別為0.84%、1.64%、3.63%，樣品溶液分別放置0、2、4、6、8、10、12、24h后，牡荊苷峰面積的RSD<3.2%，表明樣品在24h內(nèi)較穩(wěn)定。

　　2.7回收率試驗(yàn)高、中、低(6.18，3.08，0.154μg/mL)3種不同質(zhì)量濃度樣品，HPLC測定藥物濃度，血漿以及各組織加樣回收率均大于75%，見表2。

　　2.8藥-時曲線及藥動學(xué)參數(shù)新西蘭白兔靜脈注射的藥-時曲線見圖2;腹腔、肌肉注射的藥-時曲線見圖3，不同給藥方式所得藥時數(shù)據(jù)經(jīng)3P97擬合，利用F檢驗(yàn)進(jìn)行方差分析，主要藥代動力學(xué)參數(shù)見表3。新西蘭白兔靜脈注射20mg/kg后，采用統(tǒng)計(jì)矩理論計(jì)算了各個組織的AUC，各組織的AUC順序?yàn)槟I>肝>肺>脾>心>腦，說明牡荊苷在兔體內(nèi)各組織廣泛分布。將各組織AUC進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換后，依次進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)和方差分析，結(jié)果顯示，不同組織的AUC有顯著性差異(P<0.05)。見表4。